ІФА аналіз. ІФА: як проводиться аналіз? Вартість

В лабораторії гемостазу МЖЦ використовують новий високочутливий метод ІФА - ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), гетерогенний твердофазний імунний аналіз. У ході дослідження визначають наявність антитіл у крові пацієнта до збудників різноманітних хвороб.

Вартість ІФА аналізу*

Для чого здають імуноферментний аналіз

ІФА використовують у багатьох сферах медицини. У людей з ішемічною хворобою серця, атеросклерозом і гіпертонією виявляють антитіла до білків системи гемостазу – тромбіну, а2 макроглобуліну та антитромбіну 3, а також пептидним біорегуляторам згортання – ангеотензину 2 та брадикініну.

ІФА довів свою ефективність у пренатальній діагностиці та при визначенні фертильності – це АФП-тест (діагностика ущелини хребта, трисомії у плода), тести на стероїдні гормони естадіол, естріол, прогестерон.

Множинні ускладнення вагітності, безпліддя та тромбофлебіт провокує тяжке аутоімунне захворювання – антифосфоліпідний синдром. Діагностику АФС у Медичному Жіночому Центрі також проводять методом імуноферментного аналізу: визначають антитіла до кардіоліпіну, b2-глікопротеїну, протромбіну та анексину 5.

Перелік доступних методик діагностики в останні десятиліття швидко розширюється, діагности намагаються в нових методах поєднати переваги всіх колишніх аналізів, позбавившись усіх їхніх колишніх недоліків.

Останнім часом все частіше в переліку діагностичних процедур фігурує імуноферментний аналіз - сучасний і досить новий тест, про який мало відомо звичайній людині, яка не пов'язана з медициною. Тим не менш, ця методика стрімко поповнює ряди своїх прихильників серед кваліфікованого медперсоналу. Що вона є і в яких випадках її слід використовувати, можна спробувати розібратися, ознайомившись з її особливостями та головними характеристиками.

Імуноферментне дослідження - інструментально-лабораторна методика, побудована на молекулярній реакції "антиген-антитіло", що дозволяє виявляти специфічні білки в біологічних матеріалах (зразках для дослідження). Такими білками можуть бути ензими, різноманітні мікроорганізми (віруси, бактерії, грибки), найпростіші тощо.

Після відкриття методу йому було дано назву ELISA-тест, що не має відношення до імені першовідкривачів, а є абревіатурою повної назви в англійському варіанті – enzyme-linked immunosorbent assay. Медики всього світу використовують цю назву, деякі лікарі у російськомовних країнах теж так називають цей тип дослідження.

Основний принцип методу полягає у молекулярній реакції «антиген-антитіло».

Антигеном є будь-яка чужа молекула, що потрапила в організм людини у складі мікроба-збудника хвороби. Антигени є, як правило, білковими молекулами. Крім мікроорганізмів таким «чужаком» можуть бути клітини чужої крові, які не збігаються за групою або резус-фактором.

У відповідь на попадання такого антигену в організмі запускається імунна реакція, спрямована на захист від будь-яких чужих молекул. Це відбувається за рахунок синтезу спеціальних агентів імунної системи- Антитіл (імуноглобулінів). Кожне антитіло підходить тільки до певного антигену і нейтралізує патогенного «чужинця», зв'язуючись з ним у єдиний комплекс. Саме процес такого зв'язування називають реакцією «антиген-антитіло».

Види антитіл

Усі антитіла (імуноглобуліни) діляться на 5 видів залежно від того, на якому етапі імунної відповіді вони з'являються:

Для ІФА-діагностики найчастіше важливі рівні імуноглобулінів IgG, IgM та IgA. За їхніми титрами можна дізнатися, чи перехворіла людина на хворобу раніше або заразився в недавньому часі, чи виробився в неї імунітет або його організм беззахисний перед патологією.

Переваги та недоліки імуноферментного аналізу

На НаразіІФА - один з найточніших і найчутливіших методів. Він взятий на озброєння фахівцями у різних галузях медицини та продовжує розширювати сфери застосування.

Переваги методу

• Висока точність даних.
• Чутливість (дозволяє виявити необхідну речовину навіть за мінімальної присутності збудника у зразку).
• Можливість діагностики у перші дні хвороби або в інкубаційному періоді.
• Швидкість отримання даних у порівнянні з іншими методиками такої точності.
• Висока автоматизація процесу та мінімальна участь людини, що знижує похибку виконавця.
• Отримання даних про стадії патологічного процесу та ефективність обраної терапії.
• Безболісність та мала інвазивність при відборі матеріалу.

Недоліки методу

• Найчастіше дозволяє визначати відповідь організму на патогенний агент, а чи не самого збудника.
• Перед дослідженням має бути точно відоме передбачуване захворювання, оскільки тест високоспецифічний.
• Ймовірність помилкових показників, спричинених технічними моментами, прийомом лікарських засобів, одночасною присутністю кількох хронічних захворювань або порушеннями обмінних процесів в організмі хворого
• Інтерпретацію результатів повинен робити тільки висококваліфікований спеціаліст, тому що для трактування отриманих даних необхідно мати спеціальною підготовкоюта великим запасом медичних знань у певній галузі.
• ІФА – досить рідкісний аналіз, тому виконують його далеко не у всіх діагностичних лабораторіях.
• Метод досить дорогий, тому що крім реактивів у лабораторії має бути дороге чисельне обладнання та зразки антигенів, що виготовляються у спеціальних інститутах.

У яких випадках використовують імуноферментний аналіз

Повний перелік показань до призначення імуноферментного дослідження дуже широкий, він включає практично всі галузі медицини.

Найчастіше ІФА застосовують для таких цілей:

• виявлення інфекційних захворювань;
• діагностика венеричних хвороб;
• визначення імунного статусу чи окремих аутоімунних захворювань;
• ідентифікація онкомаркерів;
• визначення гормонів.

У разі інфекційних та вірусних захворювань методика дозволяє виявити такі патології:

Крім того, ІФА дозволяє швидко та ефективно визначити інфарктний стан, оцінити репродуктивний потенціал організму, виявити алергію, її джерело та ін.

Імуноферментна методика використовується для проведення клінічних досліджень під час розробки нових лікарських препаратівта в оцінці їхнього впливу на організм людини.

Типи зразків та методи їх відбору для дослідження

Найчастіше досліджуваним матеріалом для імуноферментного аналізу є кров, яку беруть з ліктьової вени пацієнта. Відбір проби проводиться натще, переважно в ранковий час. Після відбору з крові відокремлюють та прибирають ті форменні клітини, які заважають проведенню дослідження, залишаючи лише сироватку.

При діагностуванні сечостатевих інфекцій часто матеріалом стають мазки зі слизових оболонок тканин статевих органів, слиз з уретри або шийки матки, зразки з прямої кишки, зіскрібки з ерозій або виразок в області паху та з інших ділянок тіла. Мазки можуть брати і з ротової порожнини, а також з носоглотки.

Іноді імуноферментне обстеження використовується в акушерській та гінекологічній практиці під час вагітності для визначення стану навколоплідних вод. У такому разі взірцем стає амніотична рідина. Для цього відбирають невелику кількість рідини, проколивши плодовий міхур довгою голкою. Усі маніпуляції проводять стерильним інструментом, щоб мінімізувати можливі ризики.

Нерідко матеріалом стає спинномозкова чи серозна рідина. Це відбувається за місцевої анестезії, яка вводиться ін'єкційно.

Уточнити, який тип матеріалів необхідний для імуноферментного аналізу, повинен спеціаліст, який спрямовує на дослідження. Часто беруться зразки відразу кількох типів чи з різних місць. Про підготовку до здачі біоматеріалу пацієнту теж має розповісти лікар, який видає направлення на цей тип обстеження.

Підготовка до імуноферментного аналізу

Для збільшення точності даних, отриманих після імуноферментного обстеження, підготовка до відбору матеріалу має бути такою:

• за 10 діб до дослідження виключити антибіотики, противірусні та антимікотичні препарати;
• за добу необхідно виключити спиртне, куріння та прийом наркотичних речовин;
• у цей період необхідно уникати фізичного перенапруження;
• попередити спеціаліста, який виписує призначення, про всі ліки, які пацієнт приймає;
• повідомити лікаря у разі вагітності або підозри на вагітність.

Найкраще, якщо матеріали для тестування будуть відібрані вранці натще.

Якщо діагностика ставить за мету визначити стан гормонального фону, то важливо забезпечити собі спокійний стан напередодні та уникати нервової напруги. Для жінок здача крові на гормони чітко визначається періодом місячного циклу, що буде сказано лікарем у момент призначення.

За 2-3 дні до відбору матеріалу потрібно виключити з меню смажене та жирне, а перед аналізом на гепатит не є цитрусові та будь-які інші фрукти та овочі оранжевого та жовтого кольору.

Розшифровка результатів імуноферментного аналізу

Результат якісного дослідження, як правило, позначається знаками "+" (виявлено) або "-" (не виявлено).

За наявності або відсутності певних груп імуноглобулінів можна робити такі висновки:

• JgM(-), JgG(-), JgA(-) - імунітет до захворювання повністю відсутня (з таким типом антигену організм раніше не стикався);
• JgM(-), JgG(+), JgA(-) - раніше було зіткнення з даним антигеном або з вакциною;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - гострий патологічний процес (швидше за все первинний);
• JgM(-), JgG(+/-), JgA(+/-) - процес хронічного перебігу;
• JgM(+), JgG(+), JgA(+) – рецидив;
• JgM (-) – стадія одужання.

Кількісні значення мають велике інформаційне навантаження, але трактувати їх здатний тільки лікар, виходячи з попередніх показань, віку пацієнта, норм для кожного конкретного захворювання. Саме тому оцінювати результати самостійно не можна.

Скільки потрібно чекати на результати

Дана методика має багато різновидів, залежно від яких визначається термін отримання даних на руки. Середня тривалість ІФА-діагностики становить 4-6 годин, що дає змогу видати результати вже наступного дня.

Найтриваліші методики займають до 10 днів, наприклад, у разі виявлення ВІЛ-інфекції.

При гострої потребиможливе застосування експрес-методик, у яких відповідь отримують вже через 1-2 години.

Де можна пройти тестування ІФА

Оскільки обладнання для проведення такого типу діагностики є досить дорогим, то придбати його можуть не всі лабораторії. Крім того, тести, що містять специфічні антигени, мають обмежений термін придатності (зазвичай близько 1 року), тому потребують постійного оновлення.

З цих причин у державних медичних закладах ІФА-лабораторії є далеко не завжди. Найчастіше необхідно звертатися у великі приватні медичні чи великі діагностичні центри.

Для проведення ІФА-дослідження лабораторія повинна мати спеціальну ліцензію, а персонал та лаборанти мають пройти спеціальне навчання.

Найчастіше конкретний діагностичний центр чи лабораторію рекомендує лікар, який спрямовує пацієнта на обстеження.

Вартість імуноферментного дослідження

Ціна на це дослідженнязалежить від регіону країни та рівня клініки, що надає послугу. У Москві мінімальна вартість визначення одного антигену стартує від 700 крб. Якщо необхідно виявити відразу кілька імуноглобулінів, то ціна сумуватиметься.

Що стосується термінового аналізу ціна збільшується на 150-200 крб. за кожний антиген.

Незважаючи на досить високу вартість, імуноферментний аналіз дозволяє зробити обстеження пацієнта максимально інформативним та швидким, що скорочує час до початку лікування та дозволяє швидше стабілізувати стан людини.

На цьому відео представлений фільм "Основи імуноферментного аналізу".

З прогресом сучасної медицини вдається проводити більш поглиблену діагностику за підозри на ті чи інші патології у пацієнта. Одним із інформативних методів лабораторного дослідженнястав ІФА аналіз, який проводять методом забору венозної крові. Тобто для пацієнта нічого не змінюється. А ось лаборант-аналізатор ІФА проводить складну техніку дослідження забраного біоматеріалу. У тому, що таке аналізи ІФА і які тонкощі застосування ІФА методу як діагностичного, розбираємося в матеріалі нижче.

Що таке імуноферментний аналіз?

Вироблення антитіл провокують самі антигени, що проникли в організм людини. При вступі в «битву» за здоров'я організму антитіла хіба що позначають собою антигени, що з дослідженні крові бачить лаборант. Тобто в забраному біоматеріалі можна відстежити не тільки наявність інфекції, а й її сліди вже після того, як організм одужав.

Таким чином, призначаючи імуноферментний аналіз крові пацієнту, лікар може відстежити давність інфекції, ступінь її прогресування або виявити наявність імунітету до тієї чи іншої інфекції.

Процес ІФА діагностики виглядає таким чином:

• Забрана венозна кров наводиться в лабораторії стан сироватки крові;
• Потім лаборант використовує спеціальний лоток з осередками, у кожному з яких є всі необхідні антигени. Досить просто капнути в кожен осередок сироватку крові та відстежити реакцію імуноглобулінів (антитіл) на антигени. Про наявність «потрібної» реакції свідчить про зміну кольору досліджуваного матеріалу. Надалі лаборант вивчає оптичну щільність досліджуваного середовища.

• Аскаридоз та ентеробіоз (аскариди та гострики);
• Трихінельоз;
• Описторгосп в гострій та хронічній формах;
• Лямбліоз;
• Амебіоз;
• Токсоплазмоз;
• Лейшманіоз у будь-якій формі.

Важливо: імуноферментний аналіз буває як якісним, і кількісним. У першому випадку лаборант лише підтверджує чи спростовує наявність шуканої речовини у крові. У другий випадок у результаті аналізу вказують його концентрацію в організмі пацієнта.

Недоліки методу

При всіх перевагах такого способу діагностики варто розуміти, що імуноферментний аналіз крові - не спосіб знаходження причини хвороби пацієнта, а лише метод підтвердження передбачуваного лікарем діагнозу. А з огляду на те, що дослідження є досить недешевим, використовувати його треба з розумом. При цьому результати дослідження має трактувати лише кваліфікований спеціаліст.

Розшифровка результатів

Після того як ми розібрали абревіатуру ІФА і що це таке ─ з'ясували, чи варто перейти до трактування результатів. Тут важливо розуміти, що й аналіз проводили якісний, то результат буде лише позитивним чи негативним. Тобто діагностика чи підтверджує підозри лікаря щодо певного діагнозу, чи спростовує їх. У цьому випадку у бланку стоятимуть символи «+» або «-» відповідно.

Важливо: негативний результат аналізу який завжди свідчить про відсутність інфекції. Справа в тому, що антитіла до антигенів можуть формуватися протягом 14 днів після інфікування і цілком ймовірно, що вони ще не сформовані.

Якщо ж проводиться кількісний аналіз, тут визначається вид антитіл, їх кількість і стадія активності. Зокрема, при такій діагностиці визначають антитіла (імуноглобуліни) IgG та IgM, які формуються в різні періоди прогресування інфекції. Найпоширенішими варіантами результатів у цьому випадку є:

• Підвищений IgМ та повна відсутність IgG. Така картина свідчить про недавнє інфікування та гостру фазу перебігу патології.
• Підвищена активність імуноглобулінів обох видів (IgМ та IgG). Говорить про давнє та хронічне перебіг інфекційного процесу.
• Активність IgG та повна відсутність IgМ. Інфікування було не менш як півроку тому і зараз вірус перебуває в затяжній хронічній стадії.
• Відсутність антитіл IgG та IgA. Результат не визначено.
• Відсутність антитіл IgM, IgA та IgG. Свідчить про відсутність імунітету певної інфекції.
• Активність антитіл IgG, IgM та IgA говорить про загострення хронічного процесу.

Крім виявлення типів антитіл лаборант у спеціальній графі бланка вказує їх кількість на об'єм крові. Пам'ятайте, розібравшись у тому, що таке метод ІФА, не тлумачте результати самостійно. Отримані результати з точністю може інтерпретувати тільки лікар, що залежить від передбачуваного діагнозу, що вибудовується на підставі клінічної картиниу пацієнта.

Як проводиться дослідження методом ІФА

Механізм реакції

В основі імуноферментного аналізу лежить імунна реакція антигену з антитілом, а приєднання до антитіл ферментної мітки дозволяє враховувати результат реакції антиген-антитіло за появою ферментативної активності або за зміною її рівня.

Підрахунок результатів

Проведення імуноферментного аналізу

Для серодиагностики застосовуються 96 лункові полістирольні планшети, на стінах осередків яких заздалегідь адсорбується антиген. Досліджувана сироватка вноситься в комірку планшета. При цьому гомологічні антигени антитіла прикріплюються до нього. Антитіла, що не прикріпилися, видаляються промиванням. Далі в осередки вносять антитіла проти імуноглобулінів (антитіл) людини, мічені ферментом. Якщо в досліджуваній сироватці були присутні антитіла, що визначаються, то вони на цьому етапі виступлять у ролі антигенів, з якими прореагують мічені антитіла. Додавання після промивання хромогенної речовини (барвника) дозволить врахувати реакцію по фарбуванню, що розвивається, в осередках. Інтенсивність забарвлення при цьому пропорційна кількості ферменту, а отже кількості антитіл. для кожної тест-системи є свої показники обліку результатів та показники норми та патології на які треба орієнтуватися при інтерпретації результатів.

Які інфекції можна виявити методом ІФА

В основному в сучасній венерології застосовується для діагностики сифілісу (в комплексі з іншими реакціями), ВІЛ-інфекції, вірусних гепатитів. Має обмежене значення для діагностики хламідійної інфекції, цитомегаловірусної інфекції та інших герпетичних інфекцій , рівня гормонів, автоантитіл і різних маркерів онкологічних захворювань.

Як інтерпретувати результати ІФА

Дослідження наявності та рівня антитіл різних класів у деяких випадках допомагає визначити стадії інфекційного процесу

На жаль, така важлива перевага ІФА як кількісне визначення антитіл не має великого значення в практичній роботі - тобто. не дозволяє точно встановити діагноз і не впливає на дозування та термін призначення лікарських засобів.

Яка роль метод ІФА у діагностиці сифілісу

Метод ІФА в діагностиці сифілісу був вперше застосований в 1975 рік. В даний час він широко застосовується для серологічної діагностики сифілісу в Росії і використовується як підтверджує тест на сифіліс. Зазвичай проводять дослідження, що виявляє так звані сумарні антитіла до антигенів блідої трепонеми (IgM ,хоча в окремих випадках можливе і визначення тільки "ранніх" антитіл класу М.ІФА при сифілісі стає позитивним після 3 тижня з моменту інфікування і залишається позитивним досить тривалий часнавіть після лікування (іноді все життя). Тому як тест, що підтверджує лікування сифілісу, ІФА не використовується. тільки позитивний чи негативний результат, хоча можливе і кількісне визначення.